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Extraction de l'ADN par Spooling Méthode

ADN

  • L'acide désoxyribonucléique (ADN) est la molécule de l'information génétique pour toutes les formes de vie sur Terre non viraux. ADN contient des séquences qui spécifient la structure de l'acide ribonucléique (ARN) et des protéines codée. ADN est divisé en unités appelées gènes, dont chacune code pour un ARN particulier ou de la séquence de la protéine. Les gènes sont étudiés pour en apprendre davantage sur la structure et la fonction biologique, de l'évolution, de la maladie et de nombreux autres aspects des systèmes vivants. Pour étudier en détail les gènes, l'ADN doit être isolé et purifié à partir de cellules d'intérêt.

Extraction de l'ADN

  • Bien que l'ADN d'une seule cellule peut être extrait et étudié, il ne suffit pas de voir à l'œil nu. Pour obtenir une quantité suffisante pour bobinage, les plus de cellules que vous avez à travailler avec les meilleurs (plusieurs millions).

    Protocoles précises varient considérablement pour tenir compte des caractéristiques particulières des échantillons spécifiques, mais les étapes générales sont homogénéisation, la lyse, la digestion, la séparation et la collecte. La procédure est conduite de préférence dans un petit (en fonction de la taille de l'échantillon) en verre ou tube en matière plastique.

    Un échantillon est généralement mélangé au sol ou jusqu'à complètement séparer les cellules les unes des autres. Cela rend les composants cellulaires plus accessibles à des réactifs qui suivent. Détergent ou enzymes sont ensuite ajoutés à l'homogénat pour lyser les membranes cellulaires et membranes nucléaires (si les cellules sont des eucaryotes) pour libérer l'ADN. À ce stade, l'ADN est entouré par les protéines, les lipides, les glucides --- tout ce qui était contenu dans les cellules.




    Un autre digestion enzymatique peut être nécessaire de décomposer les protéines de sorte qu'ils ne se lient pas à l'ADN et interfèrent avec sa collection. ADN est séparé du reste du contenu de la cellule en ajoutant froid, pur, éthyle ou l'alcool isopropylique. ADN est pas soluble dans ces alcools de sorte qu'il se condense pour tenter de minimiser le contact avec l'alcool. L'ADN condensé s ensuite collectés, généralement par centrifugation --- ou bobinage.

ADN Spooling

  • Collecte de l'ADN par bobinage est efficace quand une grande quantité d'ADN est obtenue à partir d'une procédure d'extraction. Il est également une excellente méthode de démonstration depuis un enchevêtrement impressionnant de l'ADN pur est clairement visible.

    À la bobine de l'ADN de l'étape de séparation doit être effectuée avec soin. Si elle ne faisait pas partie du mélange réactif de lyse ajouté précédemment, une solution saline concentrée (chlorure de sodium) doit être ajouté à la solution avant l'étape d'addition de l'alcool. L'alcool froid est versé lentement sur le côté du tube à essais pour former une couche sur le dessus de la solution aqueuse, ce qui évite le mélange. Si fait correctement, l'alcool va former sa propre couche sur le dessus de la couche salée. Puis vient le bobinage.

    Pour récupérer l'ADN à partir de la couche salé, placer soigneusement une tige d'agitation en verre bien que la couche d'alcool jusqu'à ce qu'elle touche le fond du tube. Tourner lentement la tige entre les doigts, tout en regardant l'interface entre les deux couches. Si suffisamment d'ADN est présent, il sera agglutiner à l'interface entre les couches pour former une masse translucide laiteux. Faites tourner la tige pour envelopper l'ADN autour de lui (qui est la partie de bobinage) et le sortir du tube. L'ADN peut être transféré dans un autre tube d'alcool pur pour le stockage ou d'autres analyses.

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